紫外可見分光光度計是一種應用很廣的分析儀器，應用領域涉及制藥、醫(yī)療衛(wèi)生、化學化工、計量科學、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、漁業(yè)等領域中的科研、教學等各個方面，用來進行定性分析、純度檢查、結構分析、絡合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定、反應動力學研究等。

紫外可見分光光度計原理介紹：

紫外可見分光光度法的定量分析基礎是朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律。即物質(zhì)在一定濃度的吸光度與它的吸收介質(zhì)的厚度呈正比。
物質(zhì)的顏色和它的電子結構有密切的關系,當輻射(光子)引起電子躍遷使(或離子)從基 態(tài)上升到激發(fā)態(tài)時,(或離子)就會在可見區(qū)或紫外呈現(xiàn)吸光,顏色的發(fā)生或變化是和分 子的正常電子結構的變形的。當中含有一個或更多的生色基因(即具有不飽和鍵的 原子基團),輻射就會引起中電子能量的改變。
如果兩個生色團之間隔一個碳原子,則形成共軛基團,會使吸收帶移向較長的波長處(即紅 移),且吸收帶的強度顯著增加。當中含有助色基團(有未共用電子對的基團)時,也會 產(chǎn)生紅移效應。常見的助色基團有:-OH -NH2, -SH, -Cl, -Br, -I

紫外可見分光光度計的應用介紹：

(1) 定量分析
根據(jù)瑯伯-比爾定律，樣品的濃度和吸光度是成正比關系的，濃度越大，吸收值越高，所以分光光度計用的多的還是定量分析，定量分析的種類有很多，這里介紹常用的幾種定量分析方法：
A、法：法是紫外可見分光光度計諸多分析方法中使用多的一種方法。這是一種以瑯伯-比爾定律A=εbC為基礎的分析方法，某一物質(zhì)在一定波長下ε值是一個常數(shù)，石英比色皿的光程是已知的，也是一個常數(shù)。因此，可用紫外可見分光光度計在λmax波長處，測定樣品溶液的吸光度值A。然后，根據(jù)瑯伯比爾定律求出C=A/εb，則可求出該樣品溶液的含量或濃度。
B、標準法：在選定的波長處，在相同的測試條件下，分別測試標準樣品溶液C標和被測試樣品溶液C樣的吸光度A標和A樣。然后，按下式求得樣品溶液的濃度或含量。
C樣=A樣/A標×C標
C、標準曲線法
紫外可見分光光度計常用的定量分析方法是標準曲線法。即先用標準物質(zhì)配制一定濃度的溶液，再將該溶液配制成一系列的標準溶液。在一定波長下，測試每個標準溶液的吸光度，以吸光度值為縱坐標，標準溶液對應得濃度為橫坐標，繪制標準曲線。后，將樣品溶液按標準曲線繪制程序測得吸光度值，在標準曲線上查出樣品溶液對應的濃度或含量。
A、 其它分析方法
除上述幾個分析方法外經(jīng)常使用的分析方法外，還有比吸收系數(shù)法、小二乘法、解聯(lián)立方程法和示差分光光度法。
(2) 定性分析
如果未知物的紫外吸收光譜的大吸收峰波長λmax、小吸收峰波長λmin、大摩爾吸光系數(shù)εmax，以及吸收峰的數(shù)目、位置、拐點與標準光譜數(shù)據(jù)一致，就可以認為是同一種化合物。定性分析的主要目的是知道分析樣品中是什么物質(zhì)。
定量分析和定性分析是分光光度計的兩大主要功能，特別是定量分析。其它的分析都應該是從這兩大種功能中發(fā)展出來的。